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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解

载体酶切 准备灭菌的PCR离心管，配制酶切体系，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。

sgRNA长度：SpCas9一般为20nt。 sgRNA序列碱基组成：基因特异的sgRNA模板序列位于PAM序列前，PAM序列特征为NGG （N为任意核苷酸），选择3末端含有GG的sgRNA，可构成PAM序列。sgRNA序列应避免以4个以上的T结尾，GC含量最佳为30%-70%（40%-60%）。

实验流程介绍 天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 （简称Cas9）、crRNA、tracrRNA。tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。

前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。

CRISPR/Cas9实验流程包括sgRNA设计，这一关键步骤确保实验的成功。设计原则主要聚焦于20nt靶点的II型CRISPR系统（如SpCas9），确保sgRNA序列的碱基组成（基因特异性模板序列前）遵循NGG（N为任意核苷酸）的PAM序列规则。避免sgRNA序列以4个以上的T结尾，同时保持GC%含量在30%-70%。

为什么u盘显示为cd

原因分析：出现u盘插到电脑显示为CD驱动器的现象，大部分原因可能是用户在量产u盘的时候，量产成CD-ROM格式了，将u盘量产成u盘光驱了。2解决方法：利用u盘芯片检测工具chipgenius，检测一下u盘的芯片，下载想对应芯片的量产工具。用量产工具将u盘量产回u盘存储，删除u盘光驱即可。

将U盘插到电脑上出现CD驱动器的情况，可能是由多种因素导致的。首先，这可能是由于U盘在之前的使用过程中被错误地量产或格式化为CD-ROM格式，使其被电脑识别为CD驱动器而非存储设备。此外，系统错误、驱动问题或U盘本身的硬件损坏也可能导致此类现象。

U盘有两种启动方式：USB-HDD和USB-ZIP。如果U盘设置为USB-ZIP启动方式，则电脑可能将其识别为CD驱动器。因此，需要将U盘的启动方式更改为USB-HDD。

U盘插到电脑显示为CD驱动器的原因可能是U盘的存储格式或电脑的设置问题，可以通过更改U盘格式或调整电脑设置来解决。首先，这个问题可能是由U盘的存储格式引起的。一些U盘可能被格式化为ISO 9660格式，这是一个通常用于CD-ROM的标准文件系统。当这样的U盘插入电脑时，电脑可能会错误地将其识别为CD驱动器。

出现u盘插到电脑显示为CD驱动器的现象，大部分原因可能是你在量产u盘的时候，量产成CD-ROM格式了，将u盘量产成u盘光驱了。重新量产化U盘，应该是可以解决的。

几号白露2023

年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。我国古人根据对大自然的观察，将白露分为三候：“一候鸿雁来，二候玄鸟归，三候群鸟养羞。”意思是说这个节气，鸿雁与燕子等候鸟南飞避寒，百鸟开始贮存干果粮食以备过冬。这会儿农民也忙着收获庄稼，正所谓“抢秋抢秋，不抢就丢”。

年白露节气时间：农历七月廿四，公历时间是2023年09月08日05：26：31，星期五。白露后，天高云淡、气爽风凉，昼夜温差较大，夜间会感到一丝丝的凉意，明显地感觉到凉爽的秋天到来。白露三候 一候：鸿雁来 鸟从北向南飞，大曰鸿，小曰雁。鸿雁是一种大型的水鸟，主要是在河流、湖畔等地方活动。

年白露是农历的七月二十四，所以只能算七月，不能算八月。2023年白露阳历时间：9月8日05：26：31，星期五。当太阳到达黄经165度时为白露。天气渐转凉，会在清晨时分发现地面和叶子上有许多露珠，这是因夜晚水汽凝结在上面，故名白露。