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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解

载体酶切 准备灭菌的PCR离心管，配制酶切体系，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。

sgRNA长度：SpCas9一般为20nt。 sgRNA序列碱基组成：基因特异的sgRNA模板序列位于PAM序列前，PAM序列特征为NGG （N为任意核苷酸），选择3末端含有GG的sgRNA，可构成PAM序列。sgRNA序列应避免以4个以上的T结尾，GC含量最佳为30%-70%（40%-60%）。

实验流程介绍 天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 （简称Cas9）、crRNA、tracrRNA。tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。

前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。

CRISPR/Cas9实验流程包括sgRNA设计，这一关键步骤确保实验的成功。设计原则主要聚焦于20nt靶点的II型CRISPR系统（如SpCas9），确保sgRNA序列的碱基组成（基因特异性模板序列前）遵循NGG（N为任意核苷酸）的PAM序列规则。避免sgRNA序列以4个以上的T结尾，同时保持GC%含量在30%-70%。

如何把淘宝的黑号变白号了?

1、商家需要详细查看淘宝规定，找出可能触发黑号的违规行为，并进行整改。提供证明材料： 商家可以准备相关证明材料，如商品真实性证明、售后服务证明等，向淘宝客服提交，以证明自己的经营行为是合法的。与客服沟通： 主动与淘宝客服取得联系，说明整改情况，提供证明材料，并请客服协助尽快解封账号。

2、淘宝黑号转白号的方法其实挺简单的，就是不要参加或者违法活动，然后正常购物，一年之内就可以转白。淘宝黑号官方是没有具体规定的，如果想要恢复需要一系列操作，一般情况下黑号是无法进行恢复的。淘宝变成黑号后，无法领取优惠券，秒杀活动也无法参加，积分也会变得比较少。

3、淘宝黑号变白的方法并不固定，因为淘宝的系统算法和规则随时在变化。但通常，要洗白一个淘宝黑号，用户需要改善自己在淘宝平台上的行为，提升信用度，并尝试与淘宝客服沟通解决问题。以下是一些建议性的步骤：首先，用户应该检查自己是否存在违规行为。

几号白露2023

1、年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。由于天气逐渐转凉，白昼有阳光尚热，但傍晚后气温便很快下降，昼夜温差大。

2、年白露开始时间：9月8日05：26：31 2023年白露结束时间：9月23日14：49：46 2023年白露农历时间：七月廿四 2023年白露星期时间：周五 白露吃什么传统食物 十样白 浙江温州等地有过白露节的习俗。

3、白露表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。2023年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。我国古代将白露分为三候：“初候鸿雁来；二候玄鸟归；三候群鸟养羞。”说时值白露节气，鸿雁与燕子等候鸟准备南飞避寒，百鸟开始贮存千果粮食以备过冬。可见白露实际上是天气转凉的预兆。

4、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露代表天气渐渐转凉。白露是一个反映自然界气温变化的重要节令，基本结束了暑天的闷热，是秋季由闷热转向凉爽的转折点。古人以四时配五行，秋属金，金色白，故以白形容秋露。

5、年白露开始时间：09月08日05：26：31，星期五，农历七月廿四；2023年白露结束时间：09月23日14：49：46，星期六，农历八月初九。白露是农历二十四节气之一，当太阳到达黄经一百六十五度时为白露节气。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。

6、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露节气的含义是表示孟秋的结束，仲秋的开始，夏日残留的暑气逐渐消失，天地的阴气上升扩散，夜晚渐凉，昼夜温差拉大，寒生露凝，这是“白露”名由之一。白露是反映自然界寒气增长的重要节气。